免疫组化检查是通过特定的标记物来检测组织细胞内的抗原,从而辅助疾病诊断等的一种检查方法。一般来说,免疫组化检查的大致流程如下:
检查前的准备
标本获取: 首先需要获取病变组织标本,比如通过手术切除、穿刺等方式获取。如果是手术切除的标本,通常会在手术台上由病理医生初步处理,标记好标本的部位等信息。标本固定: 获取的标本会立即放入固定液中固定,常用的固定液有10%的中性福尔马林,固定的目的是为了保持细胞和组织的形态结构,一般固定时间根据标本大小等因素有所不同,通常需要数小时到一天左右。
检查中的操作
切片制作: 固定好的标本会被制成病理切片,一般会切成厚度约3 - 5微米的薄片,然后将切片贴附在载玻片上。抗原修复: 为了让切片中的抗原能够更好地暴露出来,可能会进行抗原修复步骤。常用的方法有热修复等,热修复一般是将切片放入含有柠檬酸盐缓冲液等的修复液中,在微波炉或者高压锅等设备中进行加热处理,时间可能在10 - 20分钟左右。抗体孵育: 接下来将特定的一抗与切片孵育,一抗是针对目标抗原的特异性抗体。孵育时间一般在1 - 2小时左右,温度通常保持在37℃左右。孵育结束后用缓冲液冲洗掉未结合的一抗。然后再加入二抗进行孵育,二抗能够与一抗结合,并且二抗上通常标记有显色物质等,二抗孵育时间和条件与一抗类似。
检查后的结果观察
显色观察: 经过二抗孵育等步骤后,加入显色剂使抗原 - 抗体反应部位显色。然后在显微镜下观察显色情况,根据显色的部位和强度等来判断组织细胞内是否存在目标抗原,从而辅助疾病的诊断、分型等。比如在肿瘤诊断中,通过免疫组化可以判断肿瘤是来源于上皮组织还是间叶组织等,以及肿瘤的分化程度等情况。整个免疫组化检查从标本获取到最终结果出来,一般需要1 - 3个工作日左右,但具体时间会因医院的流程和标本情况等有所不同。
