破伤风抗毒素一般在伤后24小时内注射，但如果超过24小时，仍有注射的价值。
破伤风是一种极为严重的疾病，死亡率高，尤其是新生儿和吸毒者，为此，破伤风抗毒素的注射时间非常重要。通常情况下，破伤风抗毒素需要在伤后24小时内注射，因为破伤风梭菌是厌氧菌，只能在缺氧环境中繁殖，所以伤口较深、污染严重的铁钉扎伤等情况，需要在伤后24小时内打破伤风抗毒素。如果超过24小时，破伤风抗毒素仍有注射的价值，虽然注射时间越晚，效果越差，但总比不注射要好。如果伤口污染严重，或者存在感染的风险，还需要同时注射破伤风免疫球蛋白。
需要注意的是，破伤风抗毒素和破伤风免疫球蛋白都属于被动免疫制剂，注射后可能会出现过敏反应，所以在注射前需要进行过敏试验。如果过敏试验阳性，可以采用脱敏注射法进行注射。如果对破伤风抗毒素或破伤风免疫球蛋白过敏，可以选择破伤风类毒素进行注射。