新生儿脚底采血4项检查主要检查苯丙酮尿症、先天性甲状腺功能减低症、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症（G-6-PD缺乏症）和先天性肾上腺皮质增生症。一般在新生儿出生后3-7天内进行，最迟不超过出生后20天。
一、苯丙酮尿症检查
检查目的： 通过检测血液中苯丙氨酸浓度，判断新生儿是否患苯丙酮尿症。该病是一种常见的氨基酸代谢病，由于肝脏中苯丙氨酸羟化酶缺乏或活性减低，致使苯丙氨酸代谢障碍，尿液和汗液会有特殊鼠尿臭味。筛查方法： 采用荧光定量PCR等方法，检测相关基因突变等情况来辅助判断。
二、先天性甲状腺功能减低症检查
检查目的： 检测甲状腺素（T4）和促甲状腺激素（TSH）水平，若甲状腺素分泌不足，促甲状腺激素会升高，该病会影响新生儿的生长发育和智力发育。检测指标： 正常新生儿出生后TSH会有生理性升高，一般在2-3天内下降，但先天性甲状腺功能减低症患儿TSH会持续升高，T4降低。
三、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症检查
检查目的： 确定新生儿是否存在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的情况。这种酶缺乏会导致新生儿在食用某些特定食物或接触某些药物后发生溶血性贫血。检测方式： 可通过高铁血红蛋白还原试验、荧光斑点试验等方法进行筛查，若结果异常则需进一步做G-6-PD活性测定等确诊。
四、先天性肾上腺皮质增生症检查
检查目的： 检测血液中皮质醇、促肾上腺皮质激素（ACTH）等相关激素水平，该病是由于肾上腺皮质激素合成过程中酶的缺陷，导致肾上腺皮质激素合成异常。检测内容： 会检测21-羟化酶等相关酶的活性相关指标，通过测定血液中17-羟孕酮等物质的水平来辅助诊断，若17-羟孕酮明显升高，结合临床症状等可考虑患有先天性肾上腺皮质增生症。