性激素六项检查最好在月经来潮后的第2-5天，这一段时间属于卵泡早期，可以反映卵巢的功能状态。但对于月经长期不来潮而且又急于了解检查结果者，则随时可以检查，这个时间就默认为月经前的时间，其结果也就参照黄体期的检查结果。
另外，在进行性激素六项检查前，需要注意以下几点：
1.检查基础性激素前至少一个月不能用性激素类药物，包括黄体酮、雌激素类。
2.月经任何时间检查性激素都可以，每个时段的正常值不同，但LH和FSH是伴随月经周期的变化而改变的，所以应该在月经第2-5天检查，而其他激素6项则应该在月经第3-5天检查。
3.确定是来月经第3-5天，检查性激素5项即可，可以不查孕酮，孕酮应该在黄体期检查（月经21天或排卵后7天）；
4.闭经者可随时检查，但需注明具体情况；
5.男性只要没有剧烈运动，生活规律，上午8-11点空腹可随时检查；
6.性激素六项检查与情绪、睡眠、饮食等都有关系，检查前应充分休息，清淡饮食，忌饮酒、咖啡、浓茶等。