青霉素V钾片属于青霉素类抗生素，主要作用是通过抑制细菌细胞壁的合成来发挥抗菌作用，对多种细菌具有抗菌活性，具体如下：
革兰阳性菌：对溶血性链球菌、肺炎链球菌等革兰阳性球菌有较强的抗菌活性。例如，溶血性链球菌引起的扁桃体炎、猩红热等疾病，青霉素V钾片可起到抗菌治疗作用；肺炎链球菌导致的肺炎等感染，它也能发挥抗菌功效。
部分革兰阴性菌：对脑膜炎奈瑟菌等革兰阴性菌有一定的抗菌作用。
螺旋体和放线菌：对梅毒螺旋体、钩端螺旋体以及放线菌等也有抗菌活性。
对于特殊人群：
儿童：儿童使用青霉素V钾片时需谨慎，要根据体重等因素来确定合适的剂量，但要避免低龄儿童随意使用，因为儿童的肝肾功能发育尚未完全成熟，药物代谢和排泄与成人不同，使用不当可能会对儿童身体造成不良影响，比如可能影响肝肾功能等，用药需在医生严格指导下进行。
老年人：老年人往往存在肝肾功能减退的情况，使用青霉素V钾片时需要密切监测肝肾功能，因为药物的代谢和排泄会受到影响，可能需要调整剂量以确保用药安全有效。
过敏体质者：有青霉素类药物过敏史的人群严禁使用青霉素V钾片，因为可能会发生严重的过敏反应，如过敏性休克等，这会危及生命。在使用前，医生通常会详细询问患者的药物过敏史等情况。