硝酸甘油注射液主要用于缓解心绞痛急性发作。一般来说，它能在几分钟内发挥作用。
缓解心绞痛发作
快速扩张血管：硝酸甘油注射液可以扩张冠状动脉，增加冠状动脉血流量，从而改善心肌缺血、缺氧的状况，快速缓解心绞痛症状。比如在心绞痛急性发作时，通过静脉给药，能迅速让患者的胸痛等不适得到缓解。降低心脏前后负荷：它还能扩张外周静脉，减少回心血量，降低心脏前负荷；同时也能扩张外周动脉，降低外周阻力，降低心脏后负荷，减轻心脏的做功，进一步缓解心肌缺血引起的心绞痛。
在急性心肌梗死中的应用
改善心肌灌注：对于急性心肌梗死患者，硝酸甘油注射液有助于进一步改善梗死相关血管的灌注，限制梗死面积的扩大。通过扩张血管，让更多的血液能够流向缺血的心肌区域，对心肌起到保护作用。辅助血压管理：如果急性心肌梗死患者伴有血压升高的情况，硝酸甘油注射液可以在一定程度上帮助调控血压，使其维持在相对合适的范围，既保证心肌的供血，又不会因血压过高增加心脏负担。
其他相关作用
诊断性应用：有时也可用于某些需要评估冠状动脉血流情况等的诊断性操作中，帮助医生判断冠状动脉的功能等状况。比如在一些介入检查前，使用硝酸甘油注射液来观察冠状动脉对药物的反应，辅助诊断冠状动脉疾病。心力衰竭的辅助：对于一些心力衰竭患者，尤其是伴有肺淤血等情况时，硝酸甘油注射液可以通过扩张血管，减轻心脏的容量负荷，在一定程度上缓解心力衰竭的相关症状，不过这通常是作为综合治疗的一部分来使用。但需要注意，对于严重低血压、严重贫血、青光眼患者等是禁用硝酸甘油注射液的，使用时要严格遵循医嘱。