叶酸片主要用于预防胎儿神经管畸形等，女性备孕期间及怀孕前3个月每天补充0.4毫克叶酸，可降低胎儿神经管缺陷的发生风险约70%。
预防胎儿神经管缺陷
孕前补充：女性在计划怀孕时就开始每天补充叶酸，至少持续到怀孕后3个月。这样能有效降低胎儿神经管畸形的发生概率，像无脑儿、脊柱裂等神经管缺陷疾病都能通过提前补充叶酸来预防。特殊情况：如果女性既往生育过神经管缺陷患儿，那可能需要在医生指导下增加叶酸的补充剂量，可能每天需要服用4毫克左右的叶酸，但必须由专业医生评估后使用。
治疗巨幼红细胞性贫血
作用机制：叶酸参与体内DNA的合成，当人体缺乏叶酸时，会影响DNA合成，导致红细胞发育异常，形成巨幼红细胞性贫血。补充叶酸后能促进红细胞的正常发育。具体补充：一般治疗巨幼红细胞性贫血时，通常需要每天口服叶酸5 - 10毫克，分3次服用，经过一段时间的补充，贫血症状会逐渐改善。
辅助治疗某些疾病
心血管疾病方面：有研究发现，叶酸可能对降低同型半胱氨酸水平有帮助，而高同型半胱氨酸是心血管疾病的危险因素之一。虽然不能单纯依靠叶酸来治疗心血管疾病，但在控制其他危险因素的同时，补充叶酸可能有一定的辅助作用。其他情况：在一些药物引起的叶酸缺乏情况中，比如长期服用某些抗癫痫药物的患者，可能需要补充叶酸来预防叶酸缺乏相关的问题，不过具体的补充方案要根据患者的实际用药情况和身体状况由医生来制定。
孕妇及特殊人群的注意事项
孕妇：孕妇对叶酸的需求量比普通人高，除了预防胎儿神经管畸形，充足的叶酸摄入对孕妇自身的健康也有好处，能参与孕妇体内的新陈代谢等过程。但要注意不能过量服用叶酸，过量服用可能会干扰锌的代谢等，一般每天服用0.4 - 0.8毫克比较合适。特殊人群：对于有叶酸吸收障碍的患者，比如患有肠道疾病影响叶酸吸收的人，可能需要在医生指导下调整叶酸的补充方式，可能需要注射叶酸等，而不能单纯依靠口服普通剂量的叶酸来满足身体需求。