强直性脊柱炎的确诊需要结合多方面因素。一般来说，医生会从临床表现、实验室检查和影像学检查等方面综合判断。通常，患者会出现下腰背部疼痛，病程往往超过3个月。
临床表现方面
症状表现： 患者常出现持续3个月以上的下腰背部疼痛，这种疼痛在休息时加重，活动后缓解。部分患者还可能伴有晨僵，持续时间通常超过30分钟。另外，患者的脊柱活动可能会逐渐受限，早期可能表现为弯腰、转身等活动不灵活，随着病情进展，脊柱可能会出现强直。体征检查： 医生会进行体格检查，比如“4”字试验阳性，即患者仰卧，一侧下肢伸直，另一侧下肢屈曲将足置于伸直侧下肢膝上，检查者下压屈曲侧膝关节，若骶髂关节出现疼痛则为阳性。还有脊柱前屈、后伸、侧弯活动受限等体征。
实验室检查方面
炎症指标： 血常规检查中，血沉（ESR）和C - 反应蛋白（CRP）可能会升高，这提示体内存在炎症反应。比如，部分患者的血沉可能会超过20mm/h（男性）或30mm/h（女性），C - 反应蛋白可能会高于正常参考值（一般成人C - 反应蛋白正常参考值小于10mg/L）。HLA - B27检测： 大部分强直性脊柱炎患者HLA - B27呈阳性，但HLA - B27阳性并不一定就患有强直性脊柱炎，因为正常人群中也有一定比例的HLA - B27阳性者。
影像学检查方面
X线检查： 早期X线可能无明显异常，随着病情进展，会出现骶髂关节间隙模糊、狭窄甚至消失，脊柱呈“竹节样”改变等表现。例如，在发病数年之后，脊柱的椎体之间的韧带骨化会逐渐明显，脊柱外观像竹子一样。CT检查： CT对于骶髂关节病变的诊断比X线更敏感，能更早发现骶髂关节的细微病变，如骶髂关节面的侵蚀、硬化等。磁共振成像（MRI）检查： MRI可以更早发现骶髂关节的骨髓水肿、炎症等病变，对于早期诊断强直性脊柱炎有重要意义，能在X线和CT还未出现明显异常时就检测到骶髂关节的病变情况。