叶酸片主要用于预防胎儿神经管畸形等情况。女性在怀孕前3个月至怀孕初3个月，每天补充0.4毫克叶酸，可以降低胎儿神经管缺陷的发生风险，比如能使神经管畸形的发生率降低50% - 70%。
预防胎儿神经管畸形
作用机制： 叶酸是细胞生长和繁殖所必需的物质，它参与DNA的合成等重要生理过程。胎儿在神经管发育时期，需要充足的叶酸来保证正常的发育。如果孕妇体内叶酸缺乏，就容易导致胎儿神经管畸形，如脊柱裂、无脑儿等。女性在计划怀孕时就开始补充叶酸，能为胎儿早期神经管发育提供保障。特殊人群： 对于有神经管畸形家族史的女性，更需要提前补充叶酸。这类女性在孕前3个月开始，每天补充叶酸的量可能需要在医生指导下适当增加，但一般也不超过1毫克。
治疗巨幼细胞贫血
原理： 巨幼细胞贫血是由于脱氧核糖核酸（DNA）合成障碍所引起的一种贫血，主要是体内缺乏维生素B₁₂或叶酸所致。叶酸片可以参与核酸的合成，补充叶酸能够促进巨幼红细胞的成熟，从而改善巨幼细胞贫血的症状。表现及检测： 患者会出现面色苍白、乏力、头晕等症状。通过血常规检查可以发现红细胞体积增大等异常情况，同时血清叶酸水平测定如果低于正常范围，就可以考虑是叶酸缺乏引起的巨幼细胞贫血，这时候补充叶酸片会有较好的治疗效果。
其他可能的辅助作用
心血管疾病方面： 有研究发现，叶酸可能对心血管疾病有一定的辅助作用。血液中同型半胱氨酸水平升高是心血管疾病的一个危险因素，而叶酸可以参与同型半胱氨酸的代谢，降低血液中同型半胱氨酸的水平，从而在一定程度上降低心血管疾病的发生风险。不过这只是辅助作用，不能替代心血管疾病的正规治疗。预防其他出生缺陷： 除了神经管畸形，叶酸片对其他一些出生缺陷也可能有预防作用，虽然其具体机制还在进一步研究中，但补充叶酸对胎儿的整体发育是有益的。比如有研究推测叶酸可能对唇腭裂等出生缺陷有一定的预防效果，但还需要更多的研究来证实。