检查肌萎缩侧索硬化通常需要多种检查手段综合进行。一般来说，通过神经电生理检查、影像学检查等可以辅助诊断肌萎缩侧索硬化。其中神经电生理检查中的肌电图检查是重要的检查方法之一，约90%的患者在肌电图检查中会出现异常。
神经电生理检查方面
肌电图检查： 肌电图可以发现神经源性损害的表现，如出现纤颤电位、正锐波等自发电位，以及运动单位电位时限增宽、波幅增高、多相波增加等情况。通常需要对多个肌肉进行检查，比如手部小肌肉、腿部肌肉等。神经传导速度检查： 能评估神经传导功能，肌萎缩侧索硬化患者的运动神经传导速度大多正常，但有时可能会有轻度减慢，感觉神经传导速度一般正常。
影像学检查方面
磁共振成像（MRI）： 头颅MRI平扫通常无特异性改变，但可以排除其他颅内病变。例如，能帮助排除脑梗死、脑出血、颅内肿瘤等可能类似肌萎缩侧索硬化表现的疾病。不过，约10%的患者可能会出现脊髓萎缩的MRI表现。CT检查： 一般不作为肌萎缩侧索硬化的首选检查，但有时也可用于排除骨骼肌肉系统的其他病变，比如排除颈椎病变导致的类似症状。
血液及脑脊液检查方面
血液检查： 一般包括血常规、血生化、自身抗体等检查。血常规可以了解有无贫血等情况，血生化能查看肝肾功能等基本指标，自身抗体检查有助于排除其他自身免疫性疾病导致的类似神经系统病变。例如，自身抗体检查一般无特异性改变，但能帮助鉴别诊断。脑脊液检查： 脑脊液常规、生化检查大多正常，少数患者可能会有蛋白轻度升高的情况，但一般不具有诊断特异性，主要是用于排除其他中枢神经系统疾病，如感染、炎症等。