皮质醇增多症的检查项目较多，常见的有血浆皮质醇测定，一般来说，正常人清晨皮质醇水平约为140 - 690nmol/L，而皮质醇增多症患者血浆皮质醇水平会升高且昼夜节律消失。
血浆皮质醇测定
随机血浆皮质醇测定： 可初步判断皮质醇水平是否异常，但单一的随机测定可能存在误差，因为皮质醇分泌有昼夜节律，正常人清晨最高，下午逐渐降低。24小时尿游离皮质醇测定： 由于皮质醇增多症患者尿游离皮质醇排出量增多，且不受昼夜节律影响，24小时尿游离皮质醇正常值为55 - 240nmol/24h，患者结果会明显高于此范围。
地塞米松抑制试验
小剂量地塞米松抑制试验： 口服地塞米松0.5mg，每6小时1次，共2天。正常人服药后，24小时尿游离皮质醇被抑制到小于55nmol/24h，而皮质醇增多症患者不能被抑制。大剂量地塞米松抑制试验： 口服地塞米松2mg，每6小时1次，共2天。肾上腺皮质腺瘤或癌引起的皮质醇增多症，大剂量地塞米松抑制试验多数不被抑制；而垂体性皮质醇增多症（库欣病）多数能被抑制。
促肾上腺皮质激素（ACTH）测定及动态试验
血浆ACTH测定： 正常人血浆ACTH晨高晚低，呈昼夜节律。原发性肾上腺皮质肿瘤引起的皮质醇增多症，血浆ACTH降低；库欣病患者血浆ACTH正常或轻度升高；异位ACTH综合征患者血浆ACTH明显升高。ACTH兴奋试验： 静脉注射ACTH后，观察尿17 - 羟皮质类固醇和皮质醇的变化。原发性肾上腺皮质肿瘤患者，注射ACTH后反应低下；库欣病患者有反应，但较正常人为低；异位ACTH综合征患者多数有明显反应。